在细胞培养的过程中，培养条件至关重要。细胞收到后，应及时处理并培养至良好状态，然后灌满完全培养液并封好瓶口，这被认为是运输细胞的最佳方式。在收到细胞后，请勿立即打开瓶盖，而应及时核对培养瓶上的细胞名称是否与订购的一致，并检查瓶身是否有破损或漏液等异常情况。

如果未发现漏液、污染等异常情况，建议在显微镜下观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的细胞照片（最好在40x、100x和200x倍下各拍一张），前三天的照片是重要的售后依据。如果不提供照片，默认状态良好。

贴壁细胞传代步骤：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然显微镜下观察细胞消化情况。如果大部分细胞变圆并脱落，请迅速返回操作台，轻敲培养瓶后添加5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代步骤：

1. 半换液法：将培养瓶竖着放在培养箱中静置约1小时，轻轻吸掉约3ml的培养基，然后补给3ml的完全培养基。如果培养基变色较慢，可直接加入约500ul FBS，传代时可以直接补给5ml的培养基分为两个培养瓶进行培养。一般这样传代3次后，可以进行一次离心传代以去除死细胞。
2. 离心换液法：如需分瓶，可将细胞悬液收集至离心管中并在1000RPM下离心5分钟，弃去上清后补加1-2ml培养液重悬，之后将细胞悬液按1:2的比例分至新的T25瓶中，并添加6-8ml新配置的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

细胞冻存步骤：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%的面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，再轻轻吹打使细胞脱落，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清液，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（商品编号：C7001），混匀后装入冻存管中；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如果后期需要转入液氮罐中，需首先在-80℃冰箱中存放超过24小时再进行转移。

注意事项：

运输过程中，有些细胞可能由于附着力不牢固而容易发生脱落，这是正常现象。如果脱落较多，可以将培养瓶中的所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清液进行过渡培养，之后再加入胰酶处理。请确保遵循以上步骤，以保障细胞在运输和实验过程中的稳定性与活力。

细胞问题重发情况：

在细胞出现问题时，重发的条件包括：运输过程中的细胞丢失、瓶身破损或培养液泄漏；细胞污染并在收到产品48小时内证明；常温运输的细胞静置24小时后或干冰运输的细胞复苏后状态不良（需提供实时详细的细胞状态照片）。对于细胞出现活性问题的情况，请在7天内提供实验结果。遵循这些指导原则，可以最大程度地保障细胞实验的成功，并取得理想的实验结果。

我们致力于提供高质量的细胞培养与冻存服务，尊龙凯时将继续以严谨的态度与专业的技术支持，陪伴客户共同迈向科研的前沿！