尊龙凯时提供多种固相载体转印膜,以满足Western Blot(WB)实验的需求。常见的转印膜主要有两种:NC膜和PVDF膜。
NC转印膜
NC转印膜,亦称硝酸纤维素膜,其主要材料为硝酸纤维素,具有以下特性:
- 亲水性材料
- 质地较脆,易碎
- 化学不耐受
- 无需甲醇活化
- 蛋白结合能力较低
- 背景干净
PVDF转印膜
PVDF转印膜,即聚偏二氟乙烯膜,其主要材料为聚偏二氟乙烯,具有以下特性:
- 疏水性材料
- 机械强度好,耐腐蚀
- 使用前需甲醇浸泡活化
- 蛋白结合能力较强
- 背景相对较高
膜的选择
选择膜的依据主要有以下几个方面:
根据孔径
- 一般分子量为10-20kD的蛋白,建议使用0.2μm孔径的转印膜
- 分子量大于20kD的蛋白,建议使用0.45μm孔径的转印膜
根据实验类型
- 化学发光WB:PVDF膜使用频率高于NC膜
- 荧光标记WB:NC膜使用频率高于PVDF膜
根据剥离和再检测
PVDF膜的蛋白结合能力较强,剥离过程中可以减少大量抗原(蛋白质)从膜中释放。同时,PVDF膜的机械强度好,不易碎裂,更适合多次清洗和再检测。
小知识:为什么PVDF膜需要甲醇活化而NC膜不需要?
PVDF作为一种高度疏水的聚合物,天然状态下不亲水,因此在水性缓冲液中时,不容易被润湿,从而影响蛋白质的结合。通过甲醇处理,可以将PVDF膜表面的氟替换为醇基团,增强其亲水性。活化后的PVDF膜表面带有正电基团,更易与带负电的蛋白质结合(如SDS处理的蛋白质)。而NC膜则具有亲水性,可以直接被缓冲液润湿,所以无需进行甲醇处理。
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