糖基化修饰是所有真核生物蛋白质中普遍存在的翻译后修饰之一。这一过程在内质网表面由糖基转移酶催化完成，其中聚糖分子通过N-糖苷键与新合成的蛋白质中的天冬酰胺残基连接。随后，这些修饰将经历一系列在内质网和高尔基体内的加工。糖基化修饰通常发生在Asn-X-Thr/Ser（X≠Pro）序列的N残基位置。

所有真核生物的N-聚糖均包含相同的核心序列：Manα1-3[Manα1-6]Manβ1-4GlcNAcβ1-4GlcNAcβ1-N-Asn-X-Ser/Thr。这种修饰有三种主要类型：(1) 高甘露糖型：仅延伸核心由Man残基组成。(2) 复杂型：由GlcNAc启动的核心延伸。(3) 混合型：Man启动延伸的Manα1-6臂以及GlcNAc启动延伸的Manα1-3臂。特别是在单克隆抗体的N297位点，N-糖型的结构对于Fc效应功能起着重要作用。

去除或降低岩藻糖和N-乙酰葡萄糖胺会使得单克隆抗体的Fc段与FcγRⅢa（CD16a）的结合力增强，从而提升抗体依赖的细胞介导的细胞毒性（ADCC）效应。此外，增加末端半乳糖含量可增强单克隆抗体Fc段与补体C1q的结合力，进而促进补体依赖的细胞毒性（CDC）效应。高甘露糖型N-糖可能通过结合体内的甘露糖受体而促进单克隆抗体的降解，从而缩短其半衰期。非人源单糖，如α-半乳糖和羟乙酰神经氨酸的存在可能会引发单克隆抗体的免疫原性，而在Fc段的N-糖高唾液酸化特征的抗体则可能具备抗炎作用。

复杂蛋白的N-糖修饰通常唾液酸化程度较高，唾液酸的缺失会暴露出N-糖链上的半乳糖或N-乙酰葡萄糖胺和甘露糖。半乳糖可与体内细胞，尤其是肝细胞上的无唾液酸糖蛋白受体（ASGPR）结合，而N-乙酰葡萄糖胺与甘露糖则可以与甘露糖受体结合，从而通过内吞作用促进糖蛋白的降解，进一步缩短其半衰期。

上述分析表明，商业化的抗体产品通常含有多种糖型，其不同批次之间的糖型种类和比例可能会有所差异，导致药效波动。因此，制备糖型均一性高的抗体，以确保各批次产品的稳定性，显得尤为重要。

一、N-糖检测的法规要求

N-糖基化修饰对蛋白质的生物学功能、半衰期、免疫原性、溶解性、热稳定性、蛋白酶抵抗性及其聚集体有着重要影响，是抗体生产过程中批间一致性的重要指标。因此，药企需将N-糖的检测纳入质量研究和工艺开发的标准。在细胞克隆筛选、工艺设计和确认以及工艺变化时，都应考虑N-糖修饰水平的变化。

国际会议（ICH-Q6B）及各国药典和监管机构均对N-糖基化的定量检测做出了相应要求。例如，2025年版《中国药典》中详细描述了“9405 糖蛋白的糖基化分析指导原则”和“3130 N-糖谱测定法”，确保生物制药产品的质量稳定性。

在实验流程中，操作时间不超过1小时，不涉及冻干等耗时步骤，也不含有如氰基硼氢化钠等有害试剂。该过程的荧光信号高，以确保检测结果的准确性和一致性。此外，PNGaseF酶切效率高，糖型数据一致，批次稳定性佳，展现出强大的耐用性和客户满意度。

在生物医疗领域，选择尊龙凯时的产品将有助于确保您抗体的N-糖基化修饰达到最优水平，实现最高质量的生物制药输出。