尊龙凯时培养条件包括：气相为95%空气与5%二氧化碳，理想温度为37℃。在进行细胞传代时，建议采用1:2的传代比例，初次传代后每隔两天更换培养基。

在收到细胞后，首先要确保培养瓶上的细胞名称与订购信息一致，并检查瓶身是否有破损或漏液等异常。若情况正常，请用显微镜观察细胞的生长状态，并拍摄不同倍数的照片进行保存（建议使用40x、100x和200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，未提供照片将默认细胞状态良好。

贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养上清，并用不含钙、镁的PBS轻洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后通过显微镜观察细胞的消化情况。如细胞大部分变圆并脱落，立即返回操作台，轻敲培养瓶并加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后，吸出悬液并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO₂的细胞培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代步骤

1. 采用半换液法：将竖直放置的培养瓶在培养箱静置约1小时，轻轻吸去约3ml培养基，补充3ml完全培养基。如培养基变色较慢，可直接添加约500ul FBS。在传代时可直接补充5ml完全培养基，并分两瓶培养；通常进行3次传代后可进行一次离心以去除死细胞。
2. 采用离心换液法：如果需要分瓶，将细胞悬液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养基后重悬混匀，再按1:2的比例分至新T25瓶中，添加6-8ml新配置的完全培养基，维持细胞的生长活力。后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次；
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻吹以促使细胞脱落，转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清后，沉淀细胞加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。若需转至液氮罐，则需先在-80℃环境存放24小时以上再转入液氮。

细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管时，请佩戴防护面具，将其迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬后，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO₂细胞培养箱中；
4. 第二天更换新鲜完全培养基，继续培养。

注意事项

有些细胞在运输过程中可能会发生脱落，属正常现象。如脱落数量较多，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养，沉淀后加入胰酶1-2ml轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后用5ml完全培养基终止反应，再离心，弃上清，补充1-2ml完全培养基重悬。随即按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中培养。

产品质量问题处理

1. 若细胞运输途中遭遇细胞丢失、瓶身破损或培养液漏液等问题，可以申请重发；
2. 如收到后48小时内出现细胞污染问题，请务必提供真实实验结果，核实后可重发；
3. 常温发货的细胞在静置24小时或干冰运输的细胞复苏后报告细胞存活率低于预期，也可申请重发；
4. 细胞活性问题应在收到产品7天内通过台盼蓝染色法鉴定，结果确认后可重发；
5. 记录细胞收到当天及后续2至3天的照片，有助于质量问题处理。

以上是尊龙凯时提供的详细细胞培养、传代和复苏指南，确保您在实验过程中高效、顺利地进行细胞操作。